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高灵敏TMB可溶性显色液
服务编号:H05
名称:高灵敏TMB可溶性显色液(HRP底物)
规格: 100ml
价格: 210 元
一管式TMB可溶性显色液(适用ELISA)
  TMB,即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine,是辣根过氧化物酶的常用底物,无致癌性。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下,TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。辣根过氧化物酶催化TMB显蓝色后可以使用2M H2SO4终止反应。加入硫酸后,溶液呈黄色,此时可以在450nm测定吸光度。通常的TMB显色试剂由多个组份组成,必须在使用前进行配制,并且容易产生沉淀,使用不方便,并且也容易导致检测结果不稳定。本TMB显色液采用了单一组分TMB显色技术,简化了操作步骤,并且使检测结果更加稳定可靠。
  本试剂盒最常用于ELISA检测,也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
  用于ELISA检测时,每个样品通常使用0.2毫升显色液,一个包装的本产品共可以检测约500个样品。
 
包装清单:
一管式TMB显色液(ELISA HRP显色用)   100ml
4℃避光保存,一年有效。
 
使用说明:
1. 对于ELSIA检测:
a. 参考ELISA试剂盒的实验步骤,在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5分钟。
b. 洗涤完毕后,去除洗涤液,加入200微升TMB显色液。
c. 37°C孵育5-20分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深浅。
d. 直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入50微升2M H2SO4终止反应,随后在450nm测定吸光度。
2. 对于在96孔板内进行的其他适当检测 (例如检测组织或细胞样品内源性的过氧化物酶):
a. 直接在96孔板内每孔加入10-20微升样品。
b. 加入200微升TMB显色液。
c. 37°C孵育5-20分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深浅。
d. 直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入50微升2M H2SO4终止反应,随后在450nm测定吸光度。
 
常见问题:
1. 背景显色太深。
a. 如果背景(没有样品的对照)显色太深,一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭,例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面,请选购经过适当吸附的二抗,以减小二抗的非特异性吸附。
b. 可以考虑缩短显色时间,或降低二抗浓度。另外,选择适当强度的洗涤液,或延长洗涤时间也会有所帮助。
2. 没有显色或显色太弱。
a. 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果,滴一滴稀释二抗在离心管内,检测二抗是否可以被正常显色。
b. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系,例如使用生物素检测体系。
c. 可以适当延长显色时间。
d. 如果上述改进不能获得预期效果,可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。
 
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