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10分钟无背景封闭液
服务编号:F01
名称:低背景快速封闭液
规格: 250ml
价格: 150 元
Western低背景封闭及抗体增敏稀释液
                                                                                 
     
       
       
       在western实验中,提高一抗和二抗的浓度,可有效的提高检测的灵敏度,并降低抗体孵育时间。而与此同时背景会相应提高,甚至将检测信号淹没在背景信号中。
       传统的奶粉和BSA封闭液及抗体稀释液,即使长时间封闭效果也不是很稳定,对于使用过的抗体,保存在奶粉溶液或BSA溶液中,很容易造成抗体的失活,并极易染菌变质。
       文渊阁开发的本产品,包含BSA,非蛋白封闭组合物,蛋白质保护剂。同时实现10分钟快速高效封闭,一二抗抗体有效回收,加速抗原抗体反应提升灵敏度,室温存放使用不变质,不仅适合WB操作,还适合ELISA,ICC,IHC的封闭和抗体孵育。
       本试剂不含传统的剧毒的并抑制HRP活性的防腐剂叠氮纳或硫柳汞钠,安全性很高,徒手接触无碍。本产品不影响特异性磷酸化,乙酰化,甲基化抗体检测,不影响过氧化物酶和碱性磷酸酶及荧光标记物活性,适合荧光,发光,显色等检测。
       另外本封闭液由于高度稳定并具有保存抗体活性的功能,不仅适合传统低温抗体孵育,也适合室温或37°C进行一二抗孵育,以加速WESTERN过程。本封闭液可有效的回收保存抗体,回收的一抗在4°C可保存3个月,二抗可-20℃保存半年,期间抗体可反复使用3-5次。
 
包装规格:
       125ml   一瓶    (室温避光保存,保存期1年,如产生微弱沉淀,不影响使用)
 
操作说明:
       本产品的操作及抗体孵育与传统的奶粉溶液和BSA溶液一致,但封闭时间推荐10min(可以但无需更长时间封闭), 封闭后可直接加入抗体进行后续试验。
       一二抗孵育后,用TBST缓冲液洗膜3次每次10分钟。
      
参考信息:
         根据文渊阁实验发现,在不影响背景的情况下,抗体浓度每提高一倍,检测灵敏度提高一倍,抗原抗体(包括一抗二抗)的固液两相反应在4℃真正达到反应平衡需要48h,但在前4个小时里基本可实现70%的结合量,所以即使再加大孵育时间10倍其灵敏度提升也非常有限度。在抗体浓度和孵育时间基本确定的情况下,要想继续大幅度提高检测灵敏度,就需要依赖二抗HRP的活性,及发光底物的灵敏性,文渊阁开发了应该是目前市面上最灵敏的HRP发光液,其灵敏度超出thermo最好质量发光液的4倍,millipore的16倍,比pierce普通级发光液高出250倍(客户可简单将二抗倍比稀释后点在NC膜上进行曝光检测),所以在同样条件下,如果用pierce的普通发光液可以检测10pg抗原,那么利用文渊阁的超敏发光液则可检出0.04pg抗原。另外,还有两个因素影响抗体灵敏性,一是抗原抗体的可结合性,这不仅取决于抗体的浓度和亲和力,还取决于膜上抗原的状态,文渊阁开发的膜处理液及本封闭液(尤其是前者)可有效降低抗原表面自由能,使得抗原抗体更容易诱导契合。另一个影响因素就是背景,尤其是在使用高灵敏发光底物时,背景问题尤为突出,文渊阁发现,微弱背景可大幅提升灵敏度,而过高背景则使正常信号淹没于背景之中。文渊阁的此低背景封闭液可使WB获得高信噪比。
 
 

效果展示:

     上下两图为相同的含GST融合蛋白的大肠杆菌裂解物,5倍倍比稀释的western结果。上图用传统的5%奶粉溶液进行的western封闭和抗体稀释,下图用本试剂操作,反应条件完全一样,如一起洗涤,同时孵育,一起曝光等。由此可见,本产品可大大提高western的灵敏度。

 

 
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