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1400元35天制备高特异抗体
文渊阁精准抗体制备
 
(只需Email蛋白序列,1400元,35天,即可获得灵敏度10pg检出的单抗级高特异抗体)
 
服务特色:
◆客户只需要Email蛋白质序列(磷酸化乙酰化位点)至willget001@aliyun.com
◆不同于其他任何公司,文渊阁抗体以合成肽作为抗原,但是以全基因合成和原核过表达作为检测标准。
◆特异性强,文渊阁会用大肠杆菌做诱导和非诱导的WB检测,非诱导没有信号。
◆高灵敏性,文渊阁将过表达抗原纯化定量后点在NC膜上,WB检测可实现10pg以下检测。
◆周期短,运用文渊阁自主开发的佐剂技术,免疫时间只需要3周。
◆抗体纯度高,使用抗原亲和纯化技术,使得所获得的抗体提高20倍稀释比例,背景不增加。
◆客户实验操作简单,文渊阁免费提供western高端试剂套装,降低客户端检测工作量,并保证客户端与文渊阁检测结果一致。
◆内源验证方便,客户只要把样品转好膜寄给文渊阁,收到后第二天出结果
◆可提供95%纯度的多肽抗原及其质谱,色谱报告,过表达样品,及WB验证报告
◆客户零风险,只需1400元(提供蛋白或多肽抗原免去900元),或在文渊阁官网购买4000元任何产品,即可完成。
◆可制备兔,鼠,鸡,豚鼠抗体价格不变,山羊,猪抗体价格另议
 
    
抗体质量多级质控:
                                
                   
 1,色谱质控抗原确保95%以上纯度                              2,质谱报告确定抗原无误                                    3, ELISA质控免疫反应40k以上效价                                                       
 4, 构建过表达质控抗体特异性               5, 纯化过表达抗原稀释至10pg质控抗体灵敏性               6,客户提供膜进行内源WB检测 
 
 
文渊阁精准抗体制备技术介绍:
1,   很多公司用重组蛋白作为抗原制备多抗,这样的多表位抗体特异性普遍较差,然而用蛋白抗原制备单一表位的单抗,成本又过高。文渊阁利用高纯度单表位多肽作为抗原,并结合多肽的抗原亲和纯化,从而使得多抗获得与单抗一致的特异性。
2,   很多公司也会使用多肽作为抗原,但是更多的客户发现所获得的抗体对多肽的ELISA效果很好,但对于蛋白却不能很好反应。文渊阁开发的干扰性佐剂技术,使得任意可溶性多肽所制备的抗体都可有效的识别western膜上的蛋白。
3,   抗体的亲和力是检测灵敏度的决定因素之一,文渊阁开发的免疫增强复配物,可有效的提高抗体亲和力成熟速度,仅16天可使OVA抗体滴度提升至700K,高于福氏佐剂100倍。
4,   文渊阁开发的E.coli体外表达系统,使得重组蛋白的表达无需构建载体,转化细菌,只需将T7启动子与蛋白片段ORF框PCR连接后加入到体外表达系统即可实现蛋白表达,由此文渊阁可有别于其他公司实现抗体的低成本重组蛋白检测。
5,   文渊阁开发的全自动通量式western机,配合所开发的梯度预制胶,WB高效封闭及增敏稀释液,飞克级超敏发光液,高效ELISA系统,使得客户抗体可高效进行验证。(具体产品可查看本网站相关信息)         
 
 
操作流程:
一,前期沟通
1,   客户拨打021-63033369进行沟通,以便文渊阁明确客户要求及抗体的用途从而选择性的进行抗原设计。
2,   客户将需要制备的蛋白序列发送至willget001@aliyun.com,文渊阁根据序列及客户要求进行抗原分析和表位设计。
4,   文渊阁起草合同,EMAIL,微信,或QQ发送给客户,客户无疑问后签字,通过拍照,扫描等方式将电子版合同回复至willget001@aliyun.com
5,   项目正式启动,随后文渊阁将纸质版合同,抗体验证免费套装按照合同地址一同快递给客户。
 
二,项目进行
1,   文渊阁设计并合成1条表位抗原,HPLC纯度95%以上,并用质谱核实分子量。
2,   将抗原通过化学键偶联在免疫增强载体上,并通过混合文渊阁新型佐剂进行动物免疫。
3,   免疫方式通过皮下和肌肉多点注射,免疫周期间隔两周。
4,   免疫后21天,即可取小血进行ELISA质控,并可进行客户样品质控。但此时免疫的动物并未杀掉。
5,   如果客户经验证认为抗体内源检测已合格,文渊阁可随时杀掉动物取全血纯化抗体,如果客户需要获得亲和力和滴度更高的抗体,文渊阁可加强免疫最多不超过一个月以获得更高质量抗体。
6,   文渊阁将多肽抗原共价结合在碘乙酰琼脂糖介质上,进行血清高特异抗体纯化,通过构建融合蛋白系统获得用于检测的重组蛋白。
7,   微量提纯定量后的重组蛋白3倍倍比稀释点于NC膜上,然后利用全自动WB机器进行检测。
8,   客户利用赠送的WB套装快速实现内源样品电泳转膜,并将转好的膜室温快递给文渊阁,文渊阁进行内源WB检测。文渊阁检测与客户利用WB套装检测结果会保持一致。
 
三,项目交付
1,   文渊阁将制备好的抗体取出30ul快递给客户,客户进行自行验证,如果客户需要大量购买,3500元/1ml.
2,   如果文渊阁所制备的抗体,对重组蛋白的dot blotting不能实现10pg检出,文渊阁退还客户全部费用,或者根据客户要求重新制备。
3,   由于文渊阁分两次提供抗体,客户可按照服务合同进行报账,也可按照两次购买抗体产品进行报账。
 
 
客户答疑:
1,   如何证明给我的抗体没有出错?
:1,体外表达通过DNA测序,可确定抗体的靶定蛋白的正确。当然客户也可构建自身的过表达进行验证。或者内源组织表达量的高低比较。或者RNAI干扰或基因敲除。
2,   如果过表达没有问题,内源性检测不出来,怎么办?
:如果真核过表达可以检测到,而内源检测不出,说明内源蛋白含量过低,此时可通过IP富集,使得内源蛋白量超过检测阈值。如果IP不方便操作,可通过目标蛋白区段的超滤,浓缩,加大上样量的办法使得目标蛋白上样量得到大幅提升。另外务必要使用文渊阁提供的套装中的快速封闭及增敏稀释液和飞克级超敏发光液进行WB操作,此系统可极大提高检测灵敏度。如果原核过表达不能成功,问题出在文渊阁,或全额退款,或根据客户要求重做。
3,   所制备的抗体可以用于免疫荧光,免疫组化或者IP,CHIP吗?
:我们使用单一表位所制备的抗体,首先一定会保证与western膜上的蛋白可特异性结合,另外在抗原设计的时候,我们会通过三维蛋白模建,将表位尽量选择在蛋白的表面,以有利于IHC,ICC,IP实验的顺利进行,但即使如此,由于IHC,ICC,IP的抗原很多时候以聚合物形式或者多聚甲醛修饰的形式存在,如此便增加了抗原被屏蔽的风险,所以我们建议客户对这类实验尽量选择2-3个表位进行抗体制备,但文渊阁不增加大量抗体的购买费用。IP和CHIP级抗体更好的办法是同时制备两种抗体,一种用重组蛋白作为抗原,一种用这里介绍的单表位作为抗原。在制备抗体时加入免疫增强剂并进行更长时间的免疫,这样可保证抗体的亲和力足够高。蛋白抗原由于表位比较多加入A蛋白介质后,会形成网结构,如此对于抗原浓度较少的样品,免疫沉淀效率非常高,然而用蛋白制备的抗体特异性是个问题,在免疫下拉过程中很可能引入杂蛋白,而检测抗体如果使用这里的单表位抗体,检测结果就会非常特异。
                           
版权所有©2011上海文渊阁生物科技有限公司
网址: www.willget.cn    邮箱:willget001@aliyun.com    电话: 86 021-63033369
文渊阁生物——抗体制备,多抗制备,单抗制备,预制胶,抗体制备应用技术专家