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100元/膜Western服务

           100元Western服务

 
 
文渊阁western blot 服务的特色:
由自主开发的模拟手工操作高通量全自动western blot机完成,全程无人参与,自动微信推送结果。
◆在推送结果同时推送检测条件参数,客户可据此手工操作重复实验结果。
◆客户提供废膜(检测过的废弃膜)或新转膜或样品皆可。
自动设备通过配套文渊阁膜上抗体高效剥离试剂实现一张膜的不同抗体多轮检测。每次剥离不造成抗原损失,并使得上一轮的信号不会出现在下一轮检测结果中。
◆自动设备通过配套文渊阁低背景封闭液和飞克级超敏发光液,实现WB的低背景和高灵敏。
 
 
文渊阁western blot 服务的周期:
客户提供转好的膜(或用过的废弃膜),文渊阁收到膜后24h给出结果。
客户提供裂解好的样品由文渊阁跑胶转膜,文渊阁在收到样品的48h内给出结果。
 
 
文渊阁western blot 服务的收费标准:
客户提供转好的western膜(或用过的废弃膜),首次体验客户50元/次,20次内检测200元/次,20次以上检测,100元/次。
客户提供裂解好的样品,由文渊阁跑胶转膜,每张膜额外收取300元服务费,每张膜包含一个双功能预染marker,以及最多11个客户样品。
客户只需提供裂解后的样品或膜,和一抗,无需提供其他试剂。
如果客户需要我们对组织进行裂解,定量,需与客服商议。
       
 
文渊阁western blot 服务的客户样品要求:
如果客户提供转好的western膜,只需将转好的膜自然晾干(不用封闭)后,放入自封袋中,室温寄给文渊阁。我们推荐使用NC膜,这样我们根据预染marker容易判断膜的正反面并且无需甲醇浸润,如果使用PVDF膜,客户需用2B铅笔标明膜的正反面,并加上“pvdf”字样以便我们甲醇浸润。
客户提供的一抗的寄送需要泡沫盒加冰袋低温即送。
如果客户提供裂解的样品,样品的裂解液需包含蛋白酶抑制剂,并且加入上样缓冲液煮沸5分钟后,再用泡沫盒加冰袋寄送,如此可保证样品不产生降解。
如果客户提供未裂解的组织样品,需要用干冰加厚泡沫盒,超低温寄送。
最后,客户需在所寄物品中加入一张纸,写上客户信息,及其他要求。
 
 
文渊阁western blot 服务的结果反馈方式:
800万超高像素的制冷CCD进行信号捕获,图片格式JPG或TIF。
◆使用明暗场叠加图片,同时展现发光信号和预染MARKER。
◆实验过程及条件以word形式发送给客户,以便客户重复实验和编撰文章。
◆本设备暂未实现智能灰度数据获取功能,如需要灰度数值,请联系客服。
◆首选通过微信进行结果推送,也可通过电子邮件或QQ进行结果推送。结果样式如下:
 
 
 
文渊阁western blot 服务的技术细节和协议:
(客户如无异议,文渊阁将按以下技术进行操作,如有异议,请与文渊阁客服沟通)
1,样品裂解:
文渊阁使用手持式组织研磨机(货号F12),配合WB,IP,coIP,CHIP细胞组织通用裂解液(货号F04)完成样品裂解,裂解液含有8种蛋白抑制剂(包含EDTA)。样品裂解产物通过去杂质纯化柱(货号F07)和高速离心,去除不溶物和部分可溶性高分子聚合物。
 
2,样品定量:
文渊阁一般不使用BCA定量试剂,因为有些样品的还原物质及部分氨基酸对此方法有大的影响,文渊阁使用抗干扰5分钟蛋白样品定量试剂盒(货号FO8)进行定量,此方法不受裂解液表面活性剂和样本还原物质的影响,结果更准确,操作也更快捷一些。定量后的样品用WB,IP,coIP,CHIP细胞组织通用裂解液(货号F04)调整为同样浓度。
 
3,上样缓冲液的选择:
文渊阁不使用传统含有DTT和巯基乙醇的上样缓冲液,因为这两种物质易失效,而低温冻存解冻又会形成不溶物,造成样品差异。文渊阁使用室温稳定存放的新型5xloading(货号P10),它用TCEP替代DTT和巯基乙醇,无气味也更稳定。
 
4,SDS-page胶规格的选择:
无特殊说明,文渊阁使用4-20%浓度梯度渐变型预制胶(货号p06),此胶特点机器配置,无批间差异,室温稳定存放,不出现传统胶随放置时间延长出现的问题,10k到250k皆可转到一张膜上,分子量与电泳距离为线性而非传统的指数关系,分辨率高,并且转膜不会出现传统胶大分子蛋白转不过去的现象。如果客户有意拉开小分子或大分子间的距离,请提前告知文渊阁,我们会改为15%或6%的预制胶(货号分别为P04和P00),来实现客户构想。另外请注意,文渊阁的预制胶目前只有12孔胶,所以如需文渊阁完成电泳转膜,请据此合理安排每张膜样品数量。
 
5,关于转膜缓冲液,膜类型,气泡问题和膜染色:
文渊阁使用电泳电转通用缓冲液(货号P08),既电泳和电转为一种缓冲液,电泳后直接电转,不需甲醇和冰浴,40分钟可实现胶上蛋白完全转移(判断标准是胶染色看不到蛋白),如客户无特殊说明文渊阁使用NC膜,因为其相比PVDF膜预染marker更清晰,而且不需要甲醇预处理,使用货号(F10)的除气泡工具,可以高效除去气泡。由于整个转膜系统比较高效,仅膜上双色预染marker(货号P12)就可以判断转膜情况,所以我们一般不使用立春红染膜,我们也发现染料加醋酸的立春红染液会一定程度增加抗体的非特异性吸附。
 
6,封闭液及抗体稀释液选择:
文渊阁不使用含有BSA或脱脂奶粉的封闭液,而使用含有酪蛋白和防腐组合物的低背景快速封闭液(货号F01),特制的酪蛋白封闭液由于其亲膜性更强,会迅速在western膜上形成更致密的蛋白质薄层,10分钟内可完成高度封闭,更长时间封闭也不会像奶粉溶液会阻碍抗原抗体反应。另外货号F01的封闭液被严格证实可三倍提升抗原抗体反应速度,室温放置不变质的性质有助于稳定抗体活性。
 
7,发光底物的选择:
为了最大程度提高WB检测灵敏度,文渊阁选择在灵敏度上超过thermo和millipore产品4-16倍的超敏发光液(货号F03),此发光液稳定度高,室温保存,虽然灵敏度非常高,但不会向其他品牌发光液在膜上留下很深的印迹。而这些印迹不仅影响明暗场信号叠加,而且会影响抗体剥离液对一二抗的剥离。很多客户可能困惑,这么灵敏的发光液是否会造成过高的本底,这个困惑因为上述低背景快速封闭液(货号F01)的介入得到彻底根除。
 
8,漂洗液的选择:
文渊阁使用安全防腐并复合第二非离子表面活性剂的TBST(货号F05),进行漂洗,漂洗效率更高,对膜上抗原相比传统损耗低,并且能够实现室温长久放置不变质。
 
 
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